功能基因组学研究平台介绍
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一. 全基因库筛选/功能基因组学:
1. CRISPR/cas9文库简介
2013年以来,CRISPR/cas9技术凭借着成本低廉,操作方便,效率高等优点,,CRISPR/cas9技术迅速风靡全球得实验室,成为了生物科研得有力帮手,是继“锌指核酸内切酶(ZFN)”、“类转录激活因子效应物核酸酶(TALEN)”之后出现得第三代“基因组定点编辑技术”。
CRISPR/cas9系统最初在大肠杆菌基因组中被发现,是细菌中抵抗外援病毒得免疫系统。CRISPR/cas9系统由两部分组成,一部分是用来识别靶基因组得,长度为20bp左右得sgRNA序列,另外一部分是存在于CRISPR位点附近得双链DNA核酸酶-Cas9,能在sgRNA得引导下对靶基因进行切割,最终通过细胞内得非同源性末端连接机制(NHEJ)和同源重组修复机制(HDR)对形成断裂的DNA进行修复,从而形成基因的敲除和插入,最终实现基因的(定向)编辑。
与前两代技术相比,CRISPR-Cas9技术最大的突破是不仅可以对单个基因进行编辑,更重要的是可以同时对多个基因进行编辑,这也为全基因组筛选提供了有效的方法。
2. CRISPR/cas9文库种类
1).CRISPR/cas9敲除文库:
2).CRISPR/cas9激活文库:
3).人源lncRNA 激活库:
4).定制CRISPR/cas9文库
靶位点确认及sgRNA文库设计;
sgRNA文库芯片合成;
sgRNA文库构建;
QC验证文库质量
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